Visión Científica

Cruzando puentes entre la investigación y el desarrollo

IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA ISLOTE DE PÁNCREAS POR INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA COMO MARCADOR PRONÓSTICO DE DIABETES

En el presente trabajo se implementó la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta para la identificación de Anticuerpos Contra Islote de Páncreas (ICA's) en pacientes Diabéticos tipo 1 y en sus familiares de primer grado. Para lo cual se utilizó un sustrato convencional (Páncreas de rata) y otro comercial (Páncreas de mono), además de reactivos específicos incluyendo un control positivo primario y un conjugado adsorbido específico. La comparación de resultados fue importante para elegir el sustrato más conveniente además de evaluar sus ventajas y desventajas. Conjuntamente, se correlacionaron los resultados con datos clínicos de los pacientes obtenidos mediante la Historias Clínicas concretas identificando factores de riesgo de Diabetes Mellitus en individuos genéticamente predispuestos. Implementamos también la técnica de adsorción de anticuerpos antinucleares mediante la previa obtención de núcleos purificados en solución para evitar su acción como interferentes (pre análisis de ICA's), y a la vez una técnica innocua mediante temperatura para la fijación de cortes histológicos a placas portaobjetos. Utilizando páncreas de mono como sustrato, se obtuvo mayor cantidad de resultados negativos y menor cantidad de resultados positivos con respecto a los resultados obtenidos utilizando páncreas de rata.

Presently work was implemented the technique of Immunofluorescence Indirect for the identification of Antibodies Against Island of Pancreas (ICA's) in patients Diabetic type 1 and in their relatives of first grade, for that it was used a conventional sustrate (rats' pancreas) and other commercial (monkeys' pancreas), it was also used specific reagents, including a primary positive control and a conjugated specific adsorbed. The comparison of the results was important to choose the most sustrate convenient and also to evaluate its advantages and disadvantages. The results were also correlated with the patients' clinical data obtained by means of the concrete clinical Histories identifying factors of risk of Diabetes Mellitus in individuals genetically predisposed. We also implemented the technique of adsorption of antinuclear antibodies by means of the previous obtained of nuclei purified in solution to avoid their action like interferences ICA's (previous analysis), and at the same time an innocuous technique by means of temperature for the fixation of courts histological to badges. Using monkey's pancreas like substrate, they were obtained bigger quantity of results negative and smaller quantity of positive results with regard to the obtanied results using rats pancreasº.

IDENTIFICACIÓN DE SALMONELLA SP MEDIANTE LA TÉCNICA DE REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA ANIDADO (NESTED PCR) Y TÉCNICAS CONVENCIONALES EN HUEVOS RECOLECTADOS EN LOS PRINCIPALES MERCADOS DE LA CIUDAD DE LA PAZ

La salmonelosis es una enfermedad de distribución mundial, siendo frecuntes los brotes de enfermedades transmitidas por alimentos contaminados. El 2001 en Bolivia, del total de casos reportados a nivel nacinal de infección por Salmonella, el 47% fueron positivos, de acuerdo al informe del Sistema Nacional de Información en Salud (SNIS), Servicio Departamental de Salud, Ministerio de Salud y Previsión Social. En el presente estudio se analizó 40 muestras de huevos procedente de diferentes mercados de la ciudad de La Paz mediante cultivos bacteriológicos y la técnica de reacción en cadena de la polimerasa anidado (Nested-PCR). Se identificó la sencibilidad y especificidad del método, comparada con la técnica convencional, para su posterior aplicación.

Salmonelosis is considered a disease of world distribution. Contaminated foods constitute the main source of infection. In 2001 in Bolivia, 47% of the reported cases were positive, according to the Sistema Nacional de Información en Salud (SNIS), Servicio Departamental de Salud, Ministerio de Salud y Previsión Social. In the present work samples consisted on forty eggs were analyzed, collected from different markets of La Paz city. The identification of Salmonella was established by bacteriological culture and Nested Polymerase chain reaction (Nested PCR). Salmonella sp was identified in 17.5 % of the studied samples by Nested PCR. This technique shows higher sensitivity, specificity and efficiency compared to the traditional bacteriological culture method.

DETERMINACIÓN DE LA SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE LA PRUEBA DE IFI-ANA FRENTE EL ENSAYO INMUNOENZIMÁTICO PARA ANTÍGENOS NUCLEARES EXTRACTABLES (PERFIL ENA)

En el presente estudio se ha determinado la sensibilidad y especificidad de los resultados de la prueba de inmunofluorescencia indirecta que mide anticuerpos antinucleares (FANA) frente a los resultados de la prueba de ELISA que evalúa el perfil de anticuerpos anti antígenos nucleares extractables (perfil ENA). La sensibilidad encontrada fue de 70,96%, especificidad 85,87%, valores predictivos positivo y negativo de 77,88% y 80,855 respectivamente. También se determinó el grado de correlación que existe entre los resultados de ambas pruebas, para tal efecto se utilizó el índice de Kappa el cual nos indicó que existe correlación moderada (índice 0,58 p < 0,005) entre los resultados emitidos por ambas pruebas. Este hecho es evidente por el número de resultados falsos positivos y falsos negativos por la prueba de FANA que se han obtenido durante las gestiones del 2000 al 2006. Estos resultados nos indican que la prueba de tamizaje FANA debe ser necesariamente acompañada por pruebas de laboratorio de mayor sensibilidad y especificidad como ser perfil ENA, anti ds-DNA, etc. Esto último permitirá una mejor correlación entre el laboratorio y la clínica del paciente.

The present study has determined the sensitivity and specificity of the test results of indirect immunofluorescence that measures antinuclear antibodies (FANA) compared to the results of the ELISA test that measure antibodies anti nuclear extractable antigens (ENA profile). The sensitivity found was 70.96%, specificity 85.87%, positive and negative predictive values of 77.88% and 80,85% respectively. We also determined the correlation degree between the results of both tests, for this purpose the Kappa index was used, which indicated tous that there was moderate correlation (index 0,58; p<0,005) between the results emitted by both tests. This fact is evident by the number of false positive and false negative FANA test results that have been obtained among 2000 and 2006. These results indicate that FANA screening test must necessarily be accompanied by laboratory tests of greater sensitivity and specificity, such as ENA profile, anti ds-DNA, etc. The abobe mentioned will allow for a better correlation between the laboratory and the clinicat of patient.

DETECCIÓN DEL MARCADOR Y-STR DE USO FORENSE DYS393 EN HECES HUMANAS

Mediante la amplificación por PCR del marcador molecular de uso forense DYS393, se ha evaluado cualitativamente el sistema comercial “Fecal DNA Purification Kit” de la compañía MoBio, para la purificación de ADN total a partir de muestras de heces de origen humano, conservadas a -20 ºC por 6, 13 y 90 días, sometidas a degradación ambiental por 24 horas, y colectadas en vía pública. Los resultados demostraron que el sistema es eficiente en todos los casos, tanto para remover los inhibidores de PCR como para obtener cantidad suficiente del disminuido material genético humano remanente en los restos fecales, y así permitir la detección y estudio forense del marcador de identidad genética. Un siguiente estudio cuantitativo es requerido.

Using the genetic identity marker DYS393 of forensic use, by means of PCR it has been evaluated the commercial system “Fecal DNA Purification Kit” from MoBio company for the purification of total DNA, starting from samples of recent grounds, subjected to environmental degradation along 24 hours, preserved at -20ºC, and sampled from thoroughfare. Results showed that the system is efficient in all cases, so much to remove the inhibitors of PCR like to obtain enough quantity of the diminished and remnant human genetic material in the fecal samples, reaching the goal of detecting this genetic identity molecular marker in prospective forensic applications. A quantitative analysis is required.

DETERMINACIÓN DE LA INCIDENCIA DE CÁNCER E HIPERPLASIA BENIGNA DE PRÓSTATA, MEDIANTE LA CUANTIFICACIÓN DE PSA TOTAL Y PSA LIBRE, EN PACIENTES QUE ASISTIERON AL INSTITUTO SELADIS DURANTE EL PERIÓDO 2005

En el presente trabajo se determinó la incidencia de cáncer e hiperplasia benigna de próstata, mediante la cuantificación de PSA total y PSA libre, utilizando la técnica de ELISA tipo sandwich indirecto no competitivo, en pacientes que asistieron al Instituto SELADIS durante el período 2005, donde se tomaron en cuenta a 64 pacientes. Los resultados se dividieron en aquellos pacientes con valores mayores a 10 ng/mL, entre 4 a 10 ng/mL, de 0.1 a 3.9 ng/mL y de 0 ng/mL de PSA total, con estos valores de PSA total se cuantificó el PSA libre y se halló el índice PSA libre/PSA total, encontrándose un total de 24 pacientes (68%) que presentaban hiperplasia benigna de próstata mientras que 12 pacientes (32 %) tenían cáncer de próstata. El dato del índice PSA libre/PSA total orienta al médico para un determinado tratamiento y principalmente evita que se realicen biopsias innecesarias al paciente.

In the present study we determined the incidence of cancer and benign prostatic hyperplasia, through quantification of total PSA and free PSA using the ELISA technique sandwich indirect noncompetitive type, in patients who attended the Institute SELADIS during the 2005 period, where were taken into account for 64 patients. The results were divided into those patients with values greater than 10 ng / mL, between 4 to 10 ng / mL, 0.1 to 3.9 ng / mL and 0 ng / ml PSA Altogether, these values were quantified the total PSA free PSA and free PSA found the rate / total PSA, resulting in a total of 24 patients (68%) due to BPH while 12 patients (32%) had prostate cancer. The data rate of free PSA / total PSA guides the doctor for a certain treatment and mostly avoids unnecessary biopsies were conducted to the patient.

PREVALENCIA DE PARASITISMO INTESTINAL EN NIÑOS Y MUJERES DE COMUNIDADES INDÍGENAS DEL RÍO BENI

Objetivo: Fue determinar la prevalencia de parásitos en pobladores del río Beni y estudiar su relación con el estado nutricional en los niños y con anemias en las madres. Participantes: Se estudiaron 173 madres (15 a 70 años de edad) y 305 niños y adolescentes (3 meses a 15 años) provenientes de 15 comunidades Amerindias de la Amazonía del Beni de Bolivia. Metodología: Se realizó un exámen coproparasitológico directo y por concentración con el método de Ritchie. Se evaluó el estado nutricional en base a la antropometría en los niños y la hemoglobina para determinar la prevalencia de anemia en las madres. Resultados: De las 305 muestras de heces provenientes de niños y adolescentes, el 81.9% (IC95%=77%-86%) presentaron poliparasitismo. No se observó diferencia significativa de susceptibilidad a los parásitos por sexo; pero sí con algunos parásitos por edad. Los parásitos intestinales más frecuente fueron, Trichuris trichiura (59%), Ascaris lumbricoides (49.8%), Blastocystis hominis (40.3%), Uncinarias sp. (39.7%), Entamoeba coli (35.1%) y Giardia lamblia (18.7%) De acuerdo al estado nutricional de los niños y adolescentes el 37.6% (IC95%=32%-43%) presentaron desnutrición crónica y el 6.3% (IC95%= 3.8%-9.6%) tuvieron desnutrición global. En el caso de las madres se analizaron 78 muestras de heces; el 73.1% (IC95%= 62%-82%) presentaron poliparasitismo. Los parásitos más frecuentes fueron: Uncinarias sp. (48.7%), Entamoeba coli (48.7%), Ascaris lumbricoides (46%), Trichuris trichura (39.7%) y Blastocystis hominis (32%). El 33.3% (IC95%=22%-44%) de las madres padecían de anemia. Se ha observado una tendencia no significativa a que las madres positivas a Uncinarias sp. tenían una media de hemoglobina inferior al valor de las madres negativas. Conclusión: En virtud de esta alta prevalencia de parasitismo y del mal estado nutricional en los niños y adolescentes y anemia en las madres, es importante realizar una prevención y un control de parasitismo, para garantizar un buen estado de salud.

Objective: To determine parasitic prevalence in people from the Beni River and to study its relationship with the nutritional status of children and existence of anaemia in mothers. Population: A total of 173 mothers (15-70 years of age) and 305 children and adolescents (3 months to 15 yearsold) from 15 Amerindian communities of Amazonian Bolivia (Beni River), were examined. Methods: Stools were examined for parasites identification directly on the site and after preservation and enrichment (Ritchie method) in the parasitological laboratory of SELADIS. In children, nutritional status was evaluated with anthropometry and hemoglobin was measured in mothers to evaluate anaemia prevalence. Results: Among 305 stool specimens from children and adolescents, 81.9% (IC95% =77%-86%) displayed polyparasitism. There were no differences between sexes, except with age for some species. The most frequent parasites were: Trichuris trichiura (59%), Asacaris lumbricoides (49.8%), Blastocystis hominis (40.3%), Uncinarias sp. (39.7%), Entamoeba coli (35.1%) y Giardia lamblia (18.7%). A total of 37.6% (IC95% =32%-43%) of children were stunted and 6.3% (IC95% = 3.8%-9.6%) were underweight. In mothers, 78 stool specimens were examined and 73.1% (IC95% = 62%-82%) displayed polyparasitism. The most frequent parasites were: Uncinarias sp (48.7%), Entamoeba coli (48.7%), Ascaris Lumbricoides (26%) Trichuris trichura (39.7%) and Blastocystis hominis (32%). About 33.3% (IC95% = 22%44%) of mothers were anemic. There existed a nom signicant trend in mothers housing Uncinarias sp. to have a lower hemoglobin value. Conclusions: The high prevalence of parasitism along the not very good nutritional status in children and adolescents and the frequency of anaemia in mothers, urge us to carry out an intervention to control parasitism in order to improve the health condition.

ESTUDIO DE FRECUENCIA DE CASOS DE INFECCIÓN POR CITOMEGALOVIRUS HUMANO: INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DE SEROLOGÍA

El Citomegalovirus (CMVH), es un agente etiológico importante a nivel mundial, la infección puede producir severos cuadros clínicos con complicaciones importantes. Como todos los Herpes virus produce una infección latente, con frecuentes reactivaciones a lo largo de la vida. El propósito del presente trabajo es valorar la significancia de los resultados de serología para CMVH, identificar la importancia de la infección en nuestra población y establecer criterios de interpretación de las pruebas serológicas y de esta forma contribuir en la detección de casos con infección activa y el diagnóstico correcto. Se recabaron 311 datos con solicitud de pruebas de serología para determinación de anticuerpos IgG e IgM anti-CMVH de individuos con sospecha de infección o enfermedad, que acudieron al laboratorio de Virología de SELADIS entre el 2001 al 2005. De los que 252 tenían resultados para ambos anticuerpos y el resto sólo para un tipo de anticuerpo. Se obtuvo un porcentaje de seropositividad para IgG de 68% y para IgM de 17%. De las 311 muestras el 15% (n=48) estaban en fase aguda, el 46% (n=144) se encontraban en fase latente. En el análisis de datos según género, se observó que en casos negativos y IgG(-) IgM(+), el género masculino presenta una leve predominancia, pero en general no existe una diferencia significativa entre ambos sexos. En el análisis por edades, se presentaron mayor número de casos con infección activa en infantes menores de 1 año y adultos jóvenes de 20 a 24 años. Se encontró una leve relación con el Virus de Epstein-Barr y Virus Herpes simples con frecuentes casos de reacción cruzada los cuales deben ser evaluados cuidadosamente por el médico. Se determinó también que existe mayor número de casos con actividad viral, entre los cambios de estación y en primavera/verano.

The Citomegalovirus (CMVH), is an important etiolOgy agent at world-wide level, the infection can produce severe clinical pictures with important complications. As all the Herpes virus produces a latent infection, with frequent reactivations throughout the life. The intention of the present work is to value the significance of the results of serology for CMVH, to identify the importance of the infection in our population and of establishing criteria of interpretation of the serologies tests and this form to contribute in the detection of cases with active infection and the correct diagnosis. 311 data with request of tests of serology for determination of antibodies IgG and IgM anti-CMVH of individuals with suspicion of infections or diseases were successfully obtained, that went to the laboratory of Virology of SELADIS between the 2001 to the 2005. Of that 252 had results for both antibodies and the single rest for a type of antibody. A percentage of seropositivity for IgG of 68% and IgM of 17% was obtained. Of the 311 samples 15% (n=48) were in acute phase, 46% (n=144) were in latent phase. In the analysis of data according to sort, it was observed that in negative cases and IgG (-) IgM (+), the masculine presents/displays one slight predominance, but in general a significant difference between both sexes does not exist. In the analysis by ages, they appeared greater number of cases with active infection in smaller infants of 1 year and young adults of 20 to 24 years. Was one slight relation with the Virus of Epstein-Barr and simple Virus Herpes with frequent cases of crossed reaction which must be evaluated carefully by the doctor. One also determined that greater number of cases with viral activity exists, between the changes of station and in spring/summer.

**IDENTIFICACIÓN MEDIANTE PCR DEL GEN CODIFICADOR DE LA ENTEROTOXINA DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS EN PRODUCTOS LÁCTEOS**

La enterotoxina formada por Staphylococcus aureus presente en alimentos con riesgo de contaminación como la leche y sus derivados pueden producir signos gastrointestinales. Los métodos de diagnóstico microbiológico para S. aureus enterotoxigénicos son bastante sensibles pero poco específicos y de costo elevado constituyendo en desventaja. La técnica, Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es un método alternativo para identificar al gen productor de enterotoxina de S. aureus. En este presente trabajo se analizaron 40 muestras de productos lácteos por métodos microbiológicos y moleculares. En el cultivo bacteriológico se encontró en 5 (25 %) muestras de leche y en 4 (20 %) muestras de queso. Mediante la PCR se identificó en 1 (5%) muestra a S. aureus enterotoxigénico tipo A. La contaminación con S. aureus, puede ser influenciada por la contaminación del material, conservación deficiente, manipulación inadecuada y el tiempo prolongado entre la elaboración y el consumo de estos alimentos.

The enterotoxaemia formed by present Staphylococcus aureus in foods with contamination risk as milk and its derivatives can produce gastrointestinal signs. The enterotoxigenic methods of microbiological diagnosis for S. aureus are quite sensible but little specific and of high cost constituting in disadvantage. The technique, Chain reaction of Polymers (PCR) is an alternative method to identify to the producing gene of enterotoxaemia of S. aureus. In the present work 40 milky product samples were analyzed by microbiological and molecular methods. In the bacteriological culture one was in 5 (25 %) samples of milk and in 4 (20 %) samples of cheese. By means of the PCR enterotoxigenic type A was identified in 1 (5%) shows S. aureus. The contamination with S. aureus, can be influenced by contamination of the material, deficient conservation, inadequate manipulation and the time prolonged between the elaboration and the consumption of these foods.

VENTAJAS DEL MÉTODO DE QUIMIOLUMINISCENCIA FRENTE AL DE RADIOINMUNOANÁLISIS (RIA)

Actualmente se han desarrollado sistemas automatizados para realizar diferentes determinaciones laboratoriales. Los requerimientos básicamente pretenden abaratar costos, eficiencia y calidad de resultados. Así el uso de Inmunoensayos basados en el método de Quimioluminiscencia (emisión de luz asociada con la energía), es sin duda una tecnología con importantes ventajas, donde su ejecución no requiere del marcaje con isótopos radioactivos. La perspectiva es disponer de tecnología de vanguardia, que utilice determinaciones inmunológicas más sencillas, con la ecuanimidad en la determinación y que admita realizar diferentes determinaciones de casi todas las áreas del Laboratorio Clínico tales como: Endocrinología, Inmunología, Virología, Epidemiología, Hematología, Bioquímica Clínica, etc. La quimioluminiscencia es un método de lectura que se basa en el principio de emisión luminosa a través de una reacción (Enzima-Sustrato). Los laboratorios de investigación que han desarrollado estos ensayos de quimioluminiscencia han demostrado la excelente correlación con los ensayos de referencia, como los automatizados y Radioinmunoanálisis, donde encuentran precisión, baja reactividad cruzada, gran sensibilidad analítica sobre el orden de diez veces más sensible que la mayoría de los ensayos de hoy en día. La mayor parte de los ensayos se determinan en aproximadamente 30 minutos a una hora. Este método posee una gran especificidad y sensibilidad ya que se puede determinar una reacción antígenoanticuerpo del orden de los picogramos y con un mínimo de desnaturalización. En esta revisión bibliográfica se mostrarán las ventajas del nuevo método de quimioluminiscencia en comparación con el RIA a fin de dar una opción más al bioquímico para realizar pruebas de inmunoensayo.

At the moment automated systems have been developed to make different laboratoriales determinations. The requirements basically try to lower the price of costs, efficiency and quality of results. Thus the use of Immunoassay based on the method of Quimioluminiscencia (emission of light associated with the energy), is without a doubt a technology with important advantages, where its execution does not require of the labelled with radioactive isotopes. The perspective is to have technology of vanguard, that uses simpler immunological determinations, with the security in the determination and that it admits to make different determinations from almost all the areas of the Clinical Laboratory such as: Endocrinology, Immunology, Virology, Epidemiology, Hematology, Clinical Biochemistry, etc. Chemiluminescente reading method is based on the principle of luminous emission through a reaction (Enzyme-Substrate). The research laboratories that have developed these tests of chemiluminescente have demonstrated the excellent correlation with the reference tests, like automated and the Radioimmunoassay, where they find precision, low reactivity crossed, the great analytical sensitivity on the order of ten times more sensible than most of the tests of nowadays. Most of the tests are determined in approximately 30 minutes to one hour. This method has a great specificity and sensitivity since a reaction can be determined antigen-antibody of the order of the picogram and with a minimum of denaturation. In this bibliographical revision were the advantages of the new method of chemiluminescente in comparison with the RIA in order to give one more an option to the biochemist to make tests of immunoassay

HEPATITIS E, ¿DEBEMOS PREOCUPARNOS?

El virus de la hepatitis E, ha sido identificado como uno de los agentes virales causante de Hepatitis aguda; se considera importante por su alta incidencia en adultos y su elevada mortalidad en mujeres gestantes. En el presente estudio, se determinó la frecuencia de casos de Hepatitis E en fase aguda o con memoria inmunológica, mediante la determinación de marcadores específicos contra el virus IgM e IgG anti-VHE por ELISA. En el estudio se incluyeron 123 pacientes con diagnóstico clínico de hepatitis aguda de origen viral y seronegativos para los marcadores de hepatitis A, B y C que asistieron al instituto SELADIS durante la gestión 2006. El 11% (n=14) de la población presentó reactividad sólo al marcador IgM, el 13% (n=16) presentó reactividad al marcador de memoria IgG y sólo el 2% (n=2) presentó reactividad para ambos marcadores. El grupo etáreo más afectado comprendió a pacientes mayores de 21 años; con relación al sexo, se observó una distribución uniforme entre varones y mujeres. Una importante distribución de casos se observó en la región del altiplano y valles; según la estación climática, importantes brotes se observaron en primavera e invierno.

The hepatitis E virus has been identified as a viral agent that causes acute hepatitis; it has high incidence in adults and cause important mortality in pregnant woman. The present study determined the case frequency of acute Hepatitis E and the immunologic memory against this infection, by the determination of specific antibodies IgM and IgG against HEV by ELISA. The study include 123 patients that assisted at SELADIS institute during 2006, with clinical diagnosis of acute viral hepatitis and serology negative for hepatitis A, B and C. The results showed an 11 % (n=14) of reactivity to IgM (acute infection), 13 % (n=16) of reactivity to IgG (immunologic memory) and only 2% (n=2) of reactivity to both markers. The age group most affected was patients older than 21 years; the distribution of reactive markers was uniform between man and woman, and an important number of cases were reported at altiplan and valley region; elevate frequency of cases were reported at spring and winter.